Analytické parametry stanovení obsahu lipidů v ušním mazu při použití preparativní chromatografie na tenké vrstvě

Abstract

Předložená diplomová práce se zabývá problematikou ušního mazu ve vztahu k určení analytických vlastností. Součástí práce bylo ověřit metodiku stanovení pěti tříd lipidů, která byla již v minulosti k analýze vzorku ušního mazu používána. Modifikace stávajícího pracovního postupu, které nejlépe vypovídaly byly následně použity k vlastní analýze 23 vzorku ušního mazu se zaměřením na závislosti pěti lipidových frakcí cerumina (fosfolipidy, diacylglyceroly, volné mastné kyseliny, triacylglyceroly a estery cholesterolu). Separace byla prováděna metodou preparativní chromatografie na tenké vrstvě. Získaná experimentální data byla statisticky vyhodnocena, k analýze dat byla použita analýza rozptylu, metoda hlavních komponent, faktorová analýza a analýza shluku. Analýza rozptylu testovala významnost faktoru pacient a opakovatelnost. Faktor pacient je statisticky významný zatímco opakovatelnost je statisticky nevýznamná. Metoda stanovení ušního mazu pomocí preparativní tenkovrstevné chromatografie je tedy reprodukovatelná a nedochází ke změnám složení v různých částech naakumulovaného vzorku ušního mazu. Rozdíly pozorované mezi jedinci jsou statisticky významné. Pomocí exploratorní analýzy dat byla prokázána dostatečná proměnlivost v datech pěti vyšetřovaných znaků ušního mazu, která potvrdila možnost užití dalších metod vícerozměrné statistické analýzy. Jelikož řada znaků při vyšetřování metodou exploratorní analýzy naznačovala dostatečnou korelaci, mohla se následně provést metoda hlavních komponent i faktorová analýza. Metodou hlavních komponent za použití zdrojové matice středních hodnot u pěti vyšetřovaných znaků fosfolipidy - PL, diacylglyceroly - DG, volné mastné kyseliny - VMK, triaclyglyceroly - TG a estery cholesterolu - ECH s využitím Hornovy pivotové polosumy malého výběru byl zjišten optimální počet hlavních komponent dvě a bylo odhaleno, že volné mastné kyseliny a diacylglyceroly silně pozitivně korelují, diacylglyceroly s volnými mastnými kyselinami nekoreluje s fosfolipidy ani s estery cholesterolu, a že fosfolipidy negativně korelují s estery cholesterolu. Užitím metody shluku bylo zjištěno, že triacylglyceroly, volné mastné kyseliny a diacylglyceroly jsou si vzájemně podobné, avšak silně nepodobné s estery cholesterolu a s fosfolipidy. Práce odhalila nové informace týkající se problematiky ušního mazu a přispěla tak k rozšíření znalostí o ušním mazu.