Imobilizovaná rekombinantní hyaluronan lyáza (SpHyl) - příprava nosiče pro fragmentační předkolonu

Abstract

Diplomová práce se zabývá imobilizací rekombinantní hyaluron lyázy (SpHyl) na vybrané magnetické částice. Cílem práce je vyhodnotit účinnost imobilizace, stanovit operační stabilitu a aktivitu enzymů imobilizovaných na těchto částicích. Práce se zaměřuje na přípravu nosiče pro předseparační HPLC kolonu. Teoretická část práce popisuje strukturu, vlastnosti a významu kyseliny hyaluronové. Dále enzymy štěpící kyselinu hyaluronovou a možnosti jejich imobilizace na magnetické částice. Experimentální část zahrnuje proces imobilizace SpHyl na vybrané částice, ověření její účinnosti pomocí gelové elektroforézy a následné spektrofotometrické stanovení operační stability a aktivity solubilního a imobilizovaného enzymu, stejně jako stanovení kinetických parametrů pro charakterizaci připravených nosičů. Výsledky poskytují poznatky o vhodnosti použitých částic pro předseparační kolonu připravenou pro firmu Contipro a.s., kde budou v nejbližší době prováděny aplikační experimenty.