Význam regulací signální cesty proteinu p53 v protinádorové léčbě: inhibice p53

Abstract

Cílem této práce bylo zjistit, zda a jakým způsobem ovlivňuje inhibitor proteinu p53, pifithrin-?, u lidských nádorových buněk aktivaci biochemických cest vedoucích k detekci a reparaci mitoxantronem vyvolaného poškození DNA nebo indukci apoptózy. Jako modelový systém byla zvolena buněčná linie MOLT-4 odvozená od lidské T-lymfocytární leukémie. Zaměřili jsme se na studii viability a proliferační aktivity buněk, apoptózy a buněčného cyklu pomocí flow-cytometrických metod a na expresi sledovaných proteinů (p53 a jeho fosforylované formy, p21WAF1/CIP1, ERK 1/2, lamin B a ?-aktin) využitím elektroforézy a western blotu s následnou imunodetekcí. Zjistili jsme, že pifithrin-a snižuje u buněk MOLT-4 indukci p53 a následnou indukci p21WAF1/CIP1 0,5 nmol/l mitoxantronem pouze v časném intervalu (4 hodiny), v pozdější fázi převáží potenciace cytotoxického působení mitoxantronu a indukce apoptózy, provázená již srovnatelným vzestupem p53 i p21WAF1/CIP1. Mitoxantronem indukovaná zástava buněčného cyklu v G2/M fázi není inhibicí p53 ovlivněna.