Digitální knihovna UPCE přechází na novou verzi. Omluvte prosím případné komplikace. / The UPCE Digital Library is migrating to a new version. We apologize for any inconvenience.

Publikace:
Stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorimetrickou detekcí

Diplomová práceaccess-status.metadata.listelement.badge
Zobrazit minimální záznam
dc.contributor.advisorKanďár, Roman
dc.contributor.authorSladká, Michaela
dc.date.accepted2008
dc.date.accessioned2008-08-12T06:17:56Z
dc.date.available2008-08-12T06:17:56Z
dc.date.issued2008
dc.description.abstractStanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem (valinu, leucinu a isoleucinu), methioninu, fenylalaninu a tyrosinu je v současné době nejspolehlivějším přístupem pro diagnostiku nemoci javorového sirupu, hypermethioninemie, fenylketonurie a tyrosinemie. Byla vyvinuta HPLC metoda pro stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem, methioninu, fenylalaninu a tyrosinu v plazmě a plné krvi. Před separací jsme provedli derivatizaci těchto aminokyselin pomocí o ftaldialdehydu. Pro separaci jsme použili chromatografickou kolonu LiChroCart 125 4 Purospher RP 18e, 5 ?m. Efluent byl monitorován pomocí fluorescenčního detektoru. Jako mobilní fázi A jsme použili 25 mmol/l Na2HPO4 - methanol (90:10, v/v), pH 6,5?0,1, jako B 100% methanol. Analytické parametry metody byly vyhovující pro všechny stanovované aminokyseliny. Kalibrační křivka byla lineární v celém rozsahu testovaných koncentrací. Orientační hodnoty u skupiny dobrovolných dárců krve byly 231,69 36,12 ?mol/l pro valin, 191,55 35,03 ?mol/l pro leucin, 55,34 10,79 ?mol/l pro isoleucin, 37,26 35,71 ?mol/l pro methionin, 73,17 10,01 ?mol/l pro fenylalanin a 51,08 11,87 ?mol/l pro tyrosin. Orientační hodnoty u novorozenců byly 166,34 40,01 ?mol/l pro valin, 139,84 31,36 ?mol/l pro leucin, 51,08 13,02 ?mol/l pro isoleucin, 22,06 4,70 ?mol/l pro methionin, 71,79 15,39 ?mol/l pro fenylalanin a 127,75 31,78 ?mol/l pro tyrosin. Vyvinuli jsme jednoduchou, relativně rychlou a selektivní HPLC metodu s fluorimetrickou detekcí pro stanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem, methioninu, fenylalaninu a tyrosinu v plazmě a suché krevní skvrně. Prezentovaná metoda je citlivá, přesná a správná pro vyšetřované vzorky a je vhodná jak pro výzkumné účely, tak také pro klinickou praxi.cze
dc.description.abstract-translatedThe determination of branched-chain amino acids (valine, leucine and isoleucine), methionine, phenylalanine and tyrosine is presently the most reliable direct approach to the diagnosis of maple syrup urine disease, hypermethioninemia, phenylketonuria and tyrosinemia. A HPLC method for measurement of branched-chain amino acids, methionine, phenylalanine and tyrosine in plasma and whole blood has been developed and evaluated. Before the separation, the amino acids were derivatized with o phthaldialdehyde. For the separation, reverse phase column LiChroCart 125 4 Purospher RP 18e, 5 ?m, was used. Efluent was monitored with fluorescence detector. The mixture 25 mmol/l Na2HPO4 - methanol (90:10, v/v), pH 6.5?0.1 was used as mobile phase A and 100% methanol was used as mobile phase B. The analytical performance of this method is satisfactory for determination of all amino acids. The calibration curve was linear in the whole range tested. The preliminary reference ranges in a group of blood donors are: 231.69 36.12 ?mol/l of valine, 191.55 35.03 ?mol/l of leucine, 55.34 10.79 ?mol/l of isoleucine, 37.26 35.71 ?mol/l of methionine, 73.17 10.01 ?mol/l of phenylalanine and 51.08 11.87 ?mol/l of tyrosine for plasma. The preliminary reference ranges in newborns are: 166.34 40.01 ?mol/l of valine, 139.84 31.36 ?mol/l of leucine, 51.08 13.02 ?mol/l of isoleucine, 22.06 4.70 ?mol/l of methionine, 71.79 15.39 ?mol/l of phenylalanine and 127.75 31.78 ?mol/l of tyrosine. We have developed a simple, relatively rapid and selective HPLC method with fluorescence detection for the determination of branched chain amino acids, methionine, phenylalanine and tyrosine in plasma and dried blood spots. This method provides excellent sensitivity, precision, and accuracy in follow-up samples and is suitaible for research whereas can be easily for clinical testing purposes.eng
dc.description.departmentKatedra biologických a biochemických vědcze
dc.description.gradeDokončená práce s úspěšnou obhajoboucze
dc.format91 s.cze
dc.identifierUniverzitní knihovna (sklad)cze
dc.identifier.signatureD18034
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/10195/28742
dc.language.isocze
dc.publisherUniverzita Pardubicecze
dc.subjectvalineeng
dc.subjectleucineeng
dc.subjectisoleucineeng
dc.subjectmethionineeng
dc.subjectphenylalanineeng
dc.subjecttyrosineeng
dc.subjectmaple syrup urine diseaseeng
dc.subjecthypermethioninemiaeng
dc.subjectphenylketonuriaeng
dc.subjecttyrosinemiaeng
dc.subjectfluorescence detectioneng
dc.subjectvalincze
dc.subjectleucincze
dc.subjectisoleucincze
dc.subjectmethionincze
dc.subjectfenylalanincze
dc.subjecttyrosincze
dc.subjectnemoc javorového sirupucze
dc.subjecthypermethioninemiecze
dc.subjectfenylketonuriecze
dc.subjecttyrosinemiecze
dc.subjectHPLCcze
dc.subjectfluorimetrická detekcecze
dc.thesis.degree-disciplineAnalýza biologických materiálůcze
dc.thesis.degree-grantorUniverzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologickácze
dc.thesis.degree-nameMgr.cze
dc.thesis.degree-programSpeciální chemicko-biologické oborycze
dc.titleStanovení aminokyselin s rozvětveným řetězcem pomocí HPLC s fluorimetrickou detekcícze
dc.title.alternativeDetermination of branched-chain amino acids using HPLC with fluorescence detectioneng
dc.typediplomová prácecze
dspace.entity.typePublication

Soubory

Kolekce

Diplomové práce / Theses KBBV FCHT (Mgr.)
Vysokoškolské kvalifikační práce / Theses, dissertations, etc.