Imobilizace fosfatázy na magnetické nosiče

Abstract

Diplomová práce byla zaměřena na imobilizaci kyselé fosfatázy z brambor na komerčně dostupné magnetické částice obalené glyoxalem aktivovanou 4% agarózou, jeho následnou charakterizaci a použití k defosforylaci prasečího pepsinu A. Následující vlastnosti imobilizované kyselé fosfatázy byly porovnány s její volnou formou za použití p-nitrofenylfosfátu jako substrátu: pH optimum, vliv kovových iontů, iontové síly a teploty na její aktivitu, Michaelisova konstanta (Km), stabilita v alkalické oblasti pH, a tepelná a skladovací stabilita. Pro imobilizovaný enzym byla dále zjištěna operační stabilita. Dále byla na magnetické částice obalené glyoxalem aktivovanou 4% agarózou imobilizována alkalická fosfatáza z telecí střevní sliznice. Pro volnou a imobilizovanou formu tohoto enzymu bylo stanoveno pH optimum a zjištěna závislost aktivity na přítomnosti Mg2+ a Zn2+ iontů.