Enzymem funkcionalizované nanočástice jako značky protilátek v imunosenzorech

Abstract

Cílem této diplomové práce bylo značení protilátek enzymem modifikovanými nanočásticemi (konjugát), které jsou využitelné pro kvantitativní elektrochemickou detekci antigenu pomocí imunosenzoru založeném na ELISA principu. Imunosenzor je tvořen primárními anti-ApoE protilátkami (IgG) imobilizovanými na magnetických částicích, proteinem ApoE jako antigenem a připravenými sekundárními anti-ApoE protilátkami (IgG) značenými enzymem modifikovanými mezoporézními křemičitými nanočásticemi (MSN). Jako enzymy byly využity křenová peroxidáza (HRP) a alkalická fosfatáza (ALP). Dílčí kroky spočívaly v nalezení optimálního množství enzymů imobilizovaných na nanočástice, určení optimálního ředění připravených konjugátů, a jejich funkčnost byla nakonec ověřena sestavením kompletních imunosenzorů. Pro elektrochemickou detekci byly využity miniaturizované tištěné tříelektrodové senzory, lineární a square wave voltametrie jako detekční techniky.