Stanovení kokainu v biologické matrici

Abstract

Cílem této diplomové práce bylo nalézt vhodnou metodu pro stanovení kokainu a jeho metabolitu benzoylekgoninu v lidském séru a moči. Teoretická část diplomové práce obsahuje základní informace o drogách se zaměřením na kokain. Dále pojednává o nejběžněji užívaných metodách pro stanovení drog z biologického materiálu. V experimentální části se zabýváme stanovením kokainu a benzoylekgoninu v lidském séru a moči. Na úpravu vzorků séra a moče před vlastním stanovením kokainu a benzoylekgoninu jsme použili extrakci kapalina-kapalina a extrakci pevnou fází. Jako extrakční činidla v systému kapalina-kapalina jsme použili dichlormethan:2-propanol, chloroform: 2-propanol a chloroform:ethanol. Pro extrakci pevnou fází jsme testovali kolonky Bond Elut LRC-Certify a LiChrolut TSC a dvě eluční činidla - dichlormethan: 2-propanol:hydroxid amonný a methanol-hydroxid amonný. Pro separaci kokainu a benzoylekgoninu jsme použili GC-MS (kvadrupól, elektronová ionizace). Jako vnitřní standard jsme použili kokain-D3. Pro plynovou chromatografii bylo nutné provést derivatizaci. Jako derivatizační činidla jsme testovali BSTFA s 1 % TMCS a MSTFA s jodidem amonným a ethanthiolem. Porovnáním výsledků jednotlivých metod přípravy vzorků a derivatizace jsme jako nejvhodnější metodu pro stanovení kokainu a benzoylekgoninu vybrali extrakci na kolonkách Bond Elut LRC-Certify za eluce methanol:hydroxid amonný a derivatizace s BSTFA s 1 % TMCS při teplotě 70 °C po dobu 30 minut. Pro vybranou metodu jsme následně sestavili kalibraci a analyzovali reálné a kontrolní vzorky.