Průkaz genů kódujících vybrané faktory virulence u streptokoků se skupinovým antigenem G

Abstract

Cílem diplomové práce byla optimalizace polymerázové řetězové reakce pro průkaz genů kódujících streptolyzin S, streptokokový pyrogenní exotoxin G a streptokokový mitogenní exotoxin Z u kmenů streptokoků se skupinovým antigenem G humánní a animální provenience. Zavedli jsme polymerázovou řetězovou reakci pro průkaz genu kódujícího streptolyzin S s využitím primerů sI a sII. Po úpravě koncentrace Mg2+ v reakční směsi na hodnotu 2,75 mmol/l a stanovení vhodné teploty annealingu (53 °C) jsme dosáhli detekčního limitu 28 pg. Dále jsme provedli optimalizaci polymerázové řetězové reakce pro průkaz genu kódujícího streptokokový pyrogenní exotoxin G s využitím primerů gI a gII. S reakční směsí obsahující 2,5 mmol/l Mg2+ a optimální teplotě annealingu (59 °C) jsme jako nejnižší možné detekovatelné množství DNA určili 300 pg. V neposlední řadě jsme optimalizovali polymerázovou řetězovou reakci pro průkaz genu kódujícího streptokokový mitogenní exotoxin Z s využitím primerů zI a zII. Po úpravě koncentrace Mg2+ v reakční směsi na 2,5 mmol/l a vhodné teplotě annealingu (55 °C) jsme jako nejnižší možné detekovatelné množství DNA určili 215 pg. Celkem jsme vyšetřili 190 lidských a 67 zvířecích kmenů streptokoků se skupinovým antigenem G. U všech testovaných kmenů streptokoků se skupinovým antigenem G humánní i animální provenience jsme prokázali gen kódující streptolyzin S. Žádný z lidských ani zvířecích kmenů neobsahoval gen kódující streptokokový pyrogenní exotoxin G a streptokokový mitogenní exotoxin Z.