Studium membránové lokalizace konservovaného hypotetického lipoproteinu bakterie Francisella  tularensis s využitím molekulárně-biologických metod

Čapková, Martina

Publikace:
Studium membránové lokalizace konservovaného hypotetického lipoproteinu bakterie Francisella tularensis s využitím molekulárně-biologických metod

Diplomová práceopen access

dc.contributor.advisor	Šimšová, Marcela
dc.contributor.author	Čapková, Martina
dc.date.accepted	2009
dc.date.accessioned	2009-07-03T14:10:22Z
dc.date.available	2009-07-03T14:10:22Z
dc.date.issued	2009
dc.description.abstract	Nedávno publikované studie ukazují, že proteiny membránového bakteriálního komplexu DsbA-DsbB mají přímý vztah k virulenci mikroba (Inaba and Ito, 2008). Předkládaná práce je zaměřena na studium topologie jednoho z těchto lipoproteinů Franciselle tulransis (F. tularensis subtyp tularensis), označovaného jako lipoprotein FTT1103 (gi 56708183, teoretická Mh 38 721 Da, pI 5.23) s DsbA doménou. Metodami genového inženýrství byla, pro ověření výsledků predikčních algoritmů, připravena sada vektorů pro expresi jak fúzních rekombinantních proteinů, tak i volných forem FTT1103. Expresní vektory byly vytvořeny klonováním genu pro FTT1103 a reportérového genu pro periplazmaticky aktivní enzym alkalickou fosfatázu (PhoA). K určení lokalizace lipoproteinu v Escherichia coli (E. coli) byla využita právě přirozená enzymatická aktivita PhoA při sekreci proteinů do periplazmatického prostoru díky přítomnosti funkčního N-koncového signálního peptidu. Připravené vektory byly použity pro expresi, následnou detekci proteinů a jejich enzymatické aktivity v modelovém organismu E.coli. Na základě získaných poznatků byl navržen topologický model proteinu FTT1103.	cze
dc.description.abstract-translated	Recently was published, that Francisella tularensis proteins in membrane compartment have direct relation to the microbe pathogenicity. The referred diploma thesis is focused on FTT1103 lipoprotein topology study. There was prepared a set of vectors for expression of phusion recombinant proteins as well as their free variants by using of genetic engeneering methods to validate data in bioinformatic study. Expression vectors were prepared by "in frame" cloning of FTT1103 gene and reporter gene for periplasmatically active enzyme alkaline phosphatase (PhoA). Activity of PhoA due to enzyme secretion into periplasmatic space in the presence of functionally active N-terminal signal sequence was used to determine lipoprotein localization in Escherichia coli (E. coli). The vectors were used for expression, protein detection and enzymatic activity prediction in a model organism of E. coli. Based on research data the topology model was proposed.	eng
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	67 s.	cze
dc.format.extent	680837 bytes
dc.format.mimetype	application/pdf
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.signature	D20329
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/34409
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Bez omezení	cze
dc.subject	phusion protein	eng
dc.subject	alkaline phosphatise	eng
dc.subject	Francisella tularensis	cze
dc.subject	proteinová topologie	cze
dc.subject	alkalická fosfatáza	cze
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.title	Studium membránové lokalizace konservovaného hypotetického lipoproteinu bakterie Francisella tularensis s využitím molekulárně-biologických metod	cze
dc.type	diplomová práce	cze
dspace.entity.type	Publication