Studium membránové lokalizace konservovaného hypotetického lipoproteinu bakterie Francisella tularensis s využitím molekulárně-biologických metod

Abstract

Nedávno publikované studie ukazují, že proteiny membránového bakteriálního komplexu DsbA-DsbB mají přímý vztah k virulenci mikroba (Inaba and Ito, 2008). Předkládaná práce je zaměřena na studium topologie jednoho z těchto lipoproteinů Franciselle tulransis (F. tularensis subtyp tularensis), označovaného jako lipoprotein FTT1103 (gi 56708183, teoretická Mh 38 721 Da, pI 5.23) s DsbA doménou. Metodami genového inženýrství byla, pro ověření výsledků predikčních algoritmů, připravena sada vektorů pro expresi jak fúzních rekombinantních proteinů, tak i volných forem FTT1103. Expresní vektory byly vytvořeny klonováním genu pro FTT1103 a reportérového genu pro periplazmaticky aktivní enzym alkalickou fosfatázu (PhoA). K určení lokalizace lipoproteinu v Escherichia coli (E. coli) byla využita právě přirozená enzymatická aktivita PhoA při sekreci proteinů do periplazmatického prostoru díky přítomnosti funkčního N-koncového signálního peptidu. Připravené vektory byly použity pro expresi, následnou detekci proteinů a jejich enzymatické aktivity v modelovém organismu E.coli. Na základě získaných poznatků byl navržen topologický model proteinu FTT1103.