Možnosti stanovení aktivity antioxidačních enzymů

Abstract

Lidský organismus je denně vystaven účinku volných radikálů. Ačkoli mohou být tyto molekuly na jedné straně organismem využívány v jeho prospěch, na straně druhé ho mohou vážně poškodit. Nejvýznamnější volné radikály patří mezi reaktivní formy kyslíku a dusíku. Ochranu před oxidačním poškozením aktivními formami kyslíku zajišťuje řada obranných systémů. Antioxidační obranné mechanismy zahrnují neenzymové a enzymové systémy. Mezi nejvýznamnější enzymy řadíme glutathion-S-transferasu, glutathionreduktasu a glutathionperoxidasu. Glutathion-S-transferasa hraje důležitou roli při detoxikaci, kdy katalyzuje konjugaci hydrofobních a elektrofilních látek s glutationem. Glutathionreduktasa je enzym, který zodpovídá za udržování poměru koncentrací redukovaného a oxidovaného glutathionu uvnitř buněk. Glutath ionperoxidasa katalyzuje redukci peroxidu vodíku na vodu a současně oxiduje glutathion. Aktivitu antioxidačních enzymů lze stanovit spektrofotometrickou metodou, jejímž principem je měření poklesu absorbance způsobené oxidací NADPH při 340 nm. Rychlost poklesu absorbance je přímo úměrná aktivitě daného enzymu. Mezi další metody vhodné pro stanovení aktivity těchto enzymů patří metody fluorimetrické, kolorimetrické či metody HPLC.