Metoda izolace His-tag proteinů pomocí TiO2/Fe3O4  s důrazem na čistotu finálního produktu

Hemalová, Kateřina

Publikace:
Metoda izolace His-tag proteinů pomocí TiO2/Fe3O4 s důrazem na čistotu finálního produktu

Diplomová práceopen access

dc.contributor.advisor	Bílková, Zuzana
dc.contributor.author	Hemalová, Kateřina
dc.date.accepted	2020-09-09
dc.date.accessioned	2020-09-16T14:33:08Z
dc.date.available	2020-09-16T14:33:08Z
dc.date.issued	2020
dc.date.submitted	2020-07-01
dc.description.abstract	Tato diplomová práce je zaměřená na izolaci rekombinantních proteinůspolyhistidinovou kotvouze směsi proteinů pomocí afinitní chromatografie na imobilizovaných iontech kovůa na TiO2nanotrubicích pokrytých Fe3O4nanočásticemi (TiO2NTs@Fe3O4NPs). Cílem práce bylooptimalizovat protokol izolace pomocí nanotrubicza standardních i denaturačních podmínek. Úspěšnost izolace byla vždy ověřena pomocí gelové elektroforézy.Další klíčovousoučástí práce bylozavedení metody detekce lipopolysacharidůvelučních frakcích zizolacía ověření, zda je možné lipopolysacharidy efektivně odstranit již při obohacení rekombinantních proteinů.Provlastnístanoveníbyl použita optimalizovánkomerčně dodávaný LAL test. Podařilo se dokázat, žeTiO2 nanotrubice jsou při izolacích selektivnějším nosičem než IMAC nosič. To bohuželneplatí při odstranění LPS, kdy IMAC nosiče LPS nevážou za standardních ani denaturačních podmínek. TiO2 nanotrubice nevážou LPS pouze za denaturačních podmínek.	cze
dc.description.abstract-translated	This thesis is focused on isolation of proteinswith polyhistidine tag from a mixture of proteins withimmobilized metal affinity chromatographyand TiO2nanoparticlesdecorated with Fe3O4 nanoparticles (TiO2NTs@Fe3O4NPs). Target of this thesis was to optimize protocol of isolation with TiO2nanoparticles under standard and denaturingconditions. Success of isolation was always verified by gelelectrophoresis.Nextimportantpart of this thesis wasimplementation of method to detect lipopolysaccharidesin elution fractionsfrom isolationsand verification ifit is possible to effectively remove lipopolysaccharides during the enrichment of recombinant proteins.Acommercially available LAL test was used and optimized for the determination. TiO2nanotubes have been shown to be a more selective carrier than IMAC carriers in isolations. Unfortunately, this does not apply to LPS removal, where IMAC carriers does not bind LPS under standard or denaturingconditions. TiO2nanotubes do not bind LPS only under denaturing conditions.	eng
dc.description.defence	1/ Prezentace výsledků diplomové práce. 2/ Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce. 3/ Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.	cze
dc.description.department	Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	99 s.
dc.identifier.stag	39784
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/76613
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Bez omezení
dc.subject	rekombinantní protein	cze
dc.subject	afinitní kotva	cze
dc.subject	magnetické nanočástice	cze
dc.subject	lipopolysacharidy	cze
dc.subject	LAL test	cze
dc.subject	recombinant protein	eng
dc.subject	affinity tag	eng
dc.subject	magnetic nanoparticles	eng
dc.subject	lipopolysaccharides	eng
dc.thesis.degree-discipline	Bioanalytik	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.title	Metoda izolace His-tag proteinů pomocí TiO2/Fe3O4 s důrazem na čistotu finálního produktu	cze
dc.title.alternative	Isolation of His-Tag Proteins by TiO2/Fe3O4 Solid Phase With the Impact to the Purity of Final Product	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dspace.entity.type	Publication