Metoda izolace His-tag proteinů pomocí TiO2/Fe3O4 s důrazem na čistotu finálního produktu

Abstract

Tato diplomová práce je zaměřená na izolaci rekombinantních proteinůspolyhistidinovou kotvouze směsi proteinů pomocí afinitní chromatografie na imobilizovaných iontech kovůa na TiO2nanotrubicích pokrytých Fe3O4nanočásticemi (TiO2NTs@Fe3O4NPs). Cílem práce bylooptimalizovat protokol izolace pomocí nanotrubicza standardních i denaturačních podmínek. Úspěšnost izolace byla vždy ověřena pomocí gelové elektroforézy.Další klíčovousoučástí práce bylozavedení metody detekce lipopolysacharidůvelučních frakcích zizolacía ověření, zda je možné lipopolysacharidy efektivně odstranit již při obohacení rekombinantních proteinů.Provlastnístanoveníbyl použita optimalizovánkomerčně dodávaný LAL test. Podařilo se dokázat, žeTiO2 nanotrubice jsou při izolacích selektivnějším nosičem než IMAC nosič. To bohuželneplatí při odstranění LPS, kdy IMAC nosiče LPS nevážou za standardních ani denaturačních podmínek. TiO2 nanotrubice nevážou LPS pouze za denaturačních podmínek.