Vývoj spektrofluorimetrické metody pro detekci nukleární kondenzace a fragmentace v buňkách

Abstract

Disertační práce se zaměřuje na popis apoptózy a na přehled bioanalytických metod, které se využívají při její detekci a hodnocení. V rámci disertační práce jsme s využitím sondy Hoechst 33258 vyvinuli spektrofluorimetrickou metodu pro detekci nukleární kondenzace a fragmentace. Pomocí této metody jsme popsali vliv modelových toxinů na proces nukleární kondenzace in vitro. Následně jsme výsledky získané novou metodou porovnali s výstupy dalších metod určených k detekci apoptózy, tj. detekce aktivity kaspáz, JNK a PARP aktivace, a metody TUNEL a DNA žebřík. V závěrečné části práce jsme naměřené výsledky shrnuli, diskutovali a porovnali s literaturou. Nově vyvinutá metoda využívající Hoechst 33258 je plně porovnatelná s metodou TUNEL a má navíc řadu výhod (např. rychlost, kvantifikace, nízká cena). Další velkou výhodou je možnost analyzovat velké množství vzorků najednou.