Charakterizace cytoxicity pomocí pokročilých mikroskopických technik

Abstract

Diplomová práce se zabývá charakterizací buněčné toxicity. V teoretické části jsou stručně popsány moderní mikroskopické metody včetně časosběrné mikroskopie, cytotoxického působení vybraných látek in vitro a typů buněčné smrti. Experimentální část je zaměřena na testování cytotoxicity pomocí bioanalytických a mikroskopických metod na vybrané buněčné linii SH-SY5Y. Pro studium byly vybrány modelové toxiny, jako CisPt, CdCl2, t-BHP, TiO2 P25 a MWCNTs. Všechny testy byly hodnoceny po 24, 48 a 72 hod inkubaci buněk s toxiny. Změnu životaschopnosti buněk po expozici toxinů jsme hodnotili pomocí testu WST-1, vliv toxinů na intracelulární koncentraci glutathionu jsme detekovali pomocí monochlorobimánů a vliv na nukleární kondenzaci jsme detekovali pomocí sondy Hoechst 33258. Morfologické změny buněk jsme pozorovali ve fázovém kontrastu, pro vizualizaci cytoskeletu jsme zvolili sondu Faloidin-FITC a pro pozorování jader sondu Hoechst 33258. Působení vybraných toxinů jsme dále pozorovali pomocí časosběrné mikroskopie. V závěrečné části práce jsou výsledky diskutovány.