Analytické postupy pro izolaci a stanovení významných antioxidantů

Abstract

Tato práce je zaměřena na izolace a stanovení vybraných antioxidantů v rostlinném materiálu. K tomuto účelu bylo vyuţito široké škály extrakčních metod, a to extrakční metody vyuţívající ultrazvukové lázně (USE) nebo ultrazvukové sondy (HOM), vysokotlakou extrakci rozpouštědlem (PFE), extrakci nadkritickou tekutinou (SFE) a klasickou extrakci v Soxhletově extraktoru. Orientačně byla testována také moţnost provedení výluhu antioxidantů do vody. Získané extrakty byly analyzovány metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení se spektrofotometrickým detektorem v UV oblasti (HPLC-UV). Úvodní část je zaměřena na teoretické aspekty celé práce. Jsou zde popsány antioxidanty z hlediska jejich výskytu, vlastností, chemické struktury a jejich účinků v organismu. Dále jsou podrobně popsány extrakční metody jak pro izolaci antioxidantů, tak pro jejich analýzu, včetně kapitoly věnované různým technikám stanovení antioxidační kapacity. V experimentální části práce byly optimalizovány pracovní postupy pro všechny výše uvedené extrakční metody. Zvolené podmínky byly aplikovány na izolaci antioxidantů z 16 reálných vzorků rostlin. Dále byla vyvinuta vhodná HPLC-UV metoda, která byla pouţita při analýze získaných extraktů. U všech extraktů byla také stanovena jejich antioxidační kapacita. K tomuto účelu byla vyuţita metoda zaloţená na redukci 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl radikálu (DPPH*), přičemž hodnota byla vyjádřena jako ekvivalent kyseliny galové (GAE).