Příprava nanočástic pro amplifikaci signálu při elektrochemické detekci

Abstract

Předmětem diplomové práce byla příprava nanočástic pro amplifikaci signálu při elektrochemické detekci. Vlastní zesílení signálu zajišťuje křenová peroxidáza (HRP), která označí sekundární protilátku (Ab2). Pro přípravu nanočástic byly jako materiály použity kyselina hyaluronová (HA) a silika. Mesopóry silika nanočástic umožní vazbu více molekul HRP a případně i vazbu mediátoru, který zesiluje signál, proto byl tento materiál zvolen pro přípravu nanočástic. Mesoporézní silika nanočástice byly připraveny z tetraortosilikátu (TEOS) reakcí s hexadecyltrimethylammonium bromidem (CTAB). Kyselina hyaluronová byla zvolena výchozím materiálem pro přípravu nanočástic z důvodu jednoduché přípravy. Vlivem přítomnosti velkého množství funkčních COOH skupin v molekule HA je možné předpokládat vysokou účinnost vazby a současně zesítěním vznik porézní sítě. Metoda je založena na kovaletním zesítění tzv. cross-linked reakci, kdy se karboxylové funkční skupiny HA aktivují karbodiimidem (EDC) a poté pomocí -NH2 skupin bis-(3-aminopropyl) aminu (BAPA) dojde k provázání HA řetězce. Připravené nanočástice byly charakterizovány měřením jejich velikosti a zeta potenciálu. Tvar a povrch připravených nanočástic byl zjištěn pomocí skenovacího elektronového mikroskopu. Účinnost vazby HRP byla ověřena elektroforetickou separací s následným barvením roztokem amoniakálního stříbra či alcianovou modří.