Optimalizace elektrochemické detekce hybridizace DNA na uhlíkových elektrodách

Abstract

Tato diplomová práce se zabývá elektrochemickou detekcí hybridizace DNA na povrchu uhlíkových elektrod. Na základě výsledků z předcházející studie, byl pro optimalizaci vybrán povrch uhlíkové pastové elektrody. Práce byla rozšířena pro uhlíkové tištěné elektrody, dále byla použita elektroda ze skelného uhlíku a elektrochemický senzor od firmy BVT. Jednotlivé kroky metody byly optimalizovány tak, aby umožnily lepší citlivost detekce. Kromě adsorpce DNA byla zkoušena hybridizace za vloženého potenciálu, z toho důvodu byla využita i úprava elektrody vloženým potenciálem. Dále bylo testováno několik druhů blokátorů, různá doba hybridizace, přítomnost látek urychlujících hybridizaci a další substráty vhodné pro alkalickou fosfatázu. K celé optimalizaci byly využity syntetické oligonukleotidy a sondy. Optimalizovaná metoda byla použita pro analýzu DNA potenciálně aflatoxinogenních plísní rodu Aspergillus. Vybraný úsek DNA kóduje biosyntézu aflatoxinu B1.