Vývoj a validace ELISA soupravy pro stanovení alergenních proteinů vaječného bílku

Abstract

Disertační práce se zabývá vývojem a validací imunoanalytické soupravy pro detekci a kvantifikaci alergenních proteinů vaječného bílku v potravinách metodou ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Úvodní část v teorii je věnována potravinovým alergiím a popisu jednotlivých potravinových alergenů. Další část popisuje analytické metody, které potravinové alergeny detekují a stanovují jejich množství v testované potravině. Tyto metody jsou rozděleny na fyzikálně-chemické, imunochemické a molekulárně-biologické. Třetí část se zaobírá validací imunoanalytických metod, legislativním základem validace a experimentálním a statistickým postupům ve validačním procesu. Závěrečná část popisuje legislativní vymezení problematiky potravinových alergenů. Experimentální část zahrnuje použité chemikálie, pomůcky a přístroje. Podrobně popisuje postup imunizace zvířat a vývoj polyklonální protilátky proti alergenním proteinům vaječného bílku, její izolaci a testování. Dále se zaměřuje na vývoj a optimalizaci immunoassay. V závěru se zabývá validací nově vyvinuté soupravy. Ve výsledcích a diskuzi jsou shrnuty veškeré získané výsledky a poznatky. První část je věnována sledování imunitní odpovědi imunizovaných zvířat, izolaci protilátky a jejímu testování. V druhé části jsou zaznamenány výsledky vývoje a optimalizace metody ELISA pro kvantitativní stanovení alergenních proteinů vaječného bílku. Třetí závěrečná část popisuje validaci vyvinuté soupravy, jež je zakončena mezilaboratorním porovnávacím testem s účastí jedenácti odborných pracovišť.