Příprava proteinů v umělých expresních systémech a analýza proteinových interakcí

Yilma, Petr

Publikace:
Příprava proteinů v umělých expresních systémech a analýza proteinových interakcí

Diplomová práceOmezený přístup

dc.contributor.advisor	Fischer, Jan	cze
dc.contributor.author	Yilma, Petr
dc.contributor.referee	Staněk, Václav	cze
dc.date.accepted	2010	cze
dc.date.accessioned	2010-06-17T20:36:42Z
dc.date.available	2010-06-17T20:36:42Z
dc.date.issued	2010
dc.description.abstract	Tato práce byla zaměřena na možnosti využití separačních chromatografických metod pro výrobu dvou konkrétních proteinů Air-2 (Aurora - Related serine\ threonine dinase) a Bir-1 (Baculovirus Inhibitory Repeat) z modelového organismu C.elegans. Proteiny byly identifikovány a následně bylo snahou prokázat vazebnou interakci mezi nimi. Sekvence genů Air-2 (Aurora - Related serine\ threonine dinase) a Bir-1 (Baculovirus Inhibitory Repeat) byla naklonována do speciálního expresního vektoru. Pro Air-2 byl použit pET 28 a pro Bir-1 vektor pGEX 2T. Tyto konstrukty umožní po transformaci do vhodných buněk (E.coli) expresi proteinu. Proteiny byly z buněk izolovány chemicky i mechanicky a následně identifikovány. Proteiny Air-2 a Bir-1 byly izolovány afinitní chromatografií a poté detegovány za použití nespecifických metod jako je barvení metodu Coomassie Brilliant blue nebo barvení stříbrem.V případě proteinu Bir-1 byla identifikace i hmotnostní spektrometrií. Dále byla u obu proteinů snaha prokázat vazebnou interakci mezi sebou.Tento experiment byl však ověřen pouze nespecifickou identifikaci.	cze
dc.description.abstract-translated	This study was focused on the possibility of using seperative chromatographic methods for the processing of two particular proteins Air-2 (Aurora - Related serine\threonine dinase) and Bir-1 (Baculovirus Inhibitory Repeat) from the model organism C.elegans. The proteins were identified and then there was the effort to find the binding interaction between them. The sequence of the genes Air-2 and Bir-1 was cloned into the special express vector. pET 28 was used for Air-2 and for Bir-1 the vector was pGEX 2T. These constructs allow the expression of the protein after the transformation into the correct cells (E.coli). The proteins were isolated from the cells chemically and mechanically and then identified. The proteins Air-2 abd Bir-1 were isolated using affinity chromatography and thereafter detected using nonspecific methods such as colouring via the method Coomassie Brilliant Blue or Silver Staining. In the case of Bir-1 identification also occured by using mass spectrography. Furthermore we tried to demonstrate the binding interaction between both proteins, this experiment was however confirmed purely by nonspecific identification.	eng
dc.description.department	Katedra analytické chemie	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze
dc.format	38 s.	cze
dc.format.extent	2974098 bytes	cze
dc.format.mimetype	application/pdf	cze
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.signature	D21984	cze
dc.identifier.signature	D21984
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/10195/36137
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Práce není přístupná	cze
dc.subject	rekombinantní proteiny	cze
dc.subject	afinitní chromatografie	cze
dc.subject	interakce	cze
dc.subject	Detekce	cze
dc.subject	MS analýza	cze
dc.subject	recombinant proteins	eng
dc.subject	affinity chromatography	eng
dc.subject	interaction	eng
dc.subject	detection	eng
dc.subject	MS analysis	eng
dc.thesis.degree-discipline	Analytická chemie	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.thesis.degree-name	Ing.	cze
dc.thesis.degree-program	Chemie	cze
dc.title	Příprava proteinů v umělých expresních systémech a analýza proteinových interakcí	cze
dc.title.alternative	Preparation of proteins by expression in artificial expression systems and analysis of protein interactions	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dspace.entity.type	Publication