Biosenzory a ďalšie metódy pre detekciu ihibítorov cholinesteráz

Abstract

V tejto práci boli testované rôzne spôsoby imobilizácie cholinesteráz na povrch elektrochemických senzorov typu tlačených mikroelektród. Pripravené biosenzory boli použité pri testovaní koncentračného rozmedzia, časovej stability a následne na stanovenie inhibičnej účinnosti vybraných inhibítorov. Boli stanovené kinetické parametre a diskutoval sa vplyv imobilizácie na ich hodnotu. Na stanovenie inhibičnej účinnosti boli použité tri metódy s viacerými modifikáciami. Elektrochemická metóda (enzým prítomný v roztoku a enzým imobilizovaný na senzor), spektrofotometrická metóda (komerčné zakúpené enzýmy a enzýmy z ľudského zdroja) a pH-statová metóda s ľudskými enzýmami. Celkovo bolo testovaných 253 inhibítorov prevažne zo skupiny karbamátov a salicylanilidov. U všetkých látok bola stanovená inhibičná koncentrácia a rozdeľovací koeficient pomocou programu ChemSketch. Experimentálne bol stanovený rozdeľovací koeficient u 59 látok v systéme 1-oktanol a voda. Za účelom získania interakčných modelov s využitím molekulového modelovania bolo použitých 22 vybraných inhibítorov.