Působení potenciálních léčiv na expresi genů v jaterních myofibroblastech

Abstract

Fibrotizační proces v játrech je složitý proces, při kterém je klíčová aktivace jaterních hvězdicových buněk a jaterních myofibroblastů. V této práci jsme se zabývali vlivem kultivačního prostředí na expresi genů v jaterních myofibroblastech potkanů. Srovnávali jsme běžný způsob kultivace buněk na plastových Petriho miskách s kultivací v trojrozměrném prostředí kolagenního gelu a sledovali vliv ligandu receptoru aktivovaného proliferátory peroxisomů alfa (PPAR-alfa), látky WY-14643. Myofibroblasty byly vyizolovány opakovaným pasážováním frakce neparenchymových jaterních buněk potkanů, získaných po enzymatické perfuzi jater. Izolované buňky byly vysazeny na plastové Petriho misky a do kolagenního gelu. Do kultivačních médií byla přidána sledovaná látka WY-14643 v různých koncentracích. Po 12 hodinové kultivaci byla z buněk vyizolována celková RNA a syntetizována cDNA. Exprese genů byla stanovena pomocí kvantitativní polymerázové reakce (rtRT-PCR) a data statisticky zpracována. Pozorovali jsme, že látka WY-14643 ovlivňuje rozdílně expresi mRNA myofibroblastů kultivovaných na plastové Petriho misce a myofibroblastů kultivovaných v prostředí kolagenního gelu, a její působení je závislé na koncentraci. Mezi ovlivněné geny patří protein extracelulární matrix - osteopontin, matrixové metaloproteinasy 2 a 9 (MMP-2, MMP-9), hlavní profibrogenní cytokin - transformující růstový faktor beta (TGF-beta) a receptor PPAR-alfa.