Zavedenie metódy pre izoláciu exozómov z ľudskej krvi - Gállová, Michaela (Univerzita Pardubice, 2020)
Táto diplomová práca je zameraná na zavedenie systému izolácie exozómov, pomocou ktorej by bolo možné detegovať tieto EVs z ľudskej krvi. Tento Systém je založený na kombinácii imunoanalýzy magnetickej separácie na báze imunoprecipitácie a imunochemickej detekcie vyizolovaných exozómov komerčným izolačným kitom. Princíp separácie spočíva v reakcii antigénu v podobe povrchových proteínov na exozómoch so špecifickými monoklonálnými a polyklonálnymi protilátkami imobilizovanými na komerčných magnetických časticiach namierených proti týmto exozomálnym proteínom. Prítomnosť exozómov vo vzorkách séra je detegovaná metódou Semi-Dry Western blot pomocou sekundárnych protilátok značených chrenovou peroxidázou (HRP) pre chemiluminiscenčnú detekciu po predchádzajúcom rozdelení proteínov SDS-PAGE analýzou. Konečným overením prítomnosti exozómov vo vyizolovanej frakcii je hmotnostná analýza po proteolytickom naštepení proteínov z gélu modifikovaným trypsínom.
Development of method for exosomes isolation from human blood
Keywords: exozómy; extracelulárne vezikuly; imunoprecipitácia; magnetické častice; polyklonálne a monoklonálne protilátky; SDS-PAGE; Semi-Dry Western blot analýza; ľudské sérum; exosome; extracellular vesicles; imunoprecipitation; magnetic beads; polyclonal and monoclonal antibody; SDS-PAGE; Semi-Dry Western blot analysis; human serum