<em>In vitro</em> testování cytotoxicity na pankreatických nádorových liniích

Abstract

Tato diplomová práce se zabývá využitím in vitro metod pro hodnocení cytotoxicity vybraných látek na pankreatických nádorových liniích AsPC-1 a BxPC-3. Testovanými látkami byly cisplatina, acetaminofen/paracetamol (APAP) a chlorid kademnatý (CdCl), které se liší mechanismem účinku i toxikologickým profilem. Cílem práce bylo porovnat odpověď obou buněčných linií po 24 a 48 hodinách expozice se zaměřením na změny dehydrogenázové aktivity, hladiny redukovaného glutathionu a buněčné morfologie. Cytotoxicita byla hodnocena pomocí resazurinového testu jako změna dehydrogenázové aktivity a oxidační stres byl sledován prostřednictvím stanovení intracelulární koncentrace redukovaného glutathionu pomocí fluorescenční sondy monochlorobimanu. Doplňkově byly morfologické změny buněk vizualizovány mikroskopicky s využitím fázového kontrastu a fluorescenčního značení aktinového cytoskeletu a buněčných jader. Výsledky ukázaly rozdílnou citlivost buněčných linií k jednotlivým látkám. Linie AsPC-1 vykazovala výraznější odpověď na CdCl, zatímco u linie BxPC-3 byl pozorován výrazný pokles dehydrogenázové aktivity zejména po působení vyšších koncentrací cisplatiny. APAP v nižších testovaných koncentracích nevyvolal výraznou cytotoxickou odpověď, zatímco koncentrace 10 mM vedla u obou linií k poklesu sledovaných parametrů. Získané výsledky podporují význam volby vhodného buněčného modelu při hodnocení cytotoxicity a poukazují na souvislost mezi redoxním stavem buněk, dehydrogenázovou aktivitou a morfologickými projevy buněčného poškození.