Cytotoxicita vybraných isochinolinových alkaloidů indukcí apoptózy

Abstract

Tato diplomová práce se zabývá vlivem vybraných devíti isochinolinových alkaloidů čeledi Papaveraceae a Fumariaceae na viabilitu, proliferaci a indukci apoptózy u nádorových buněčných liniích A549, Jurkat a MOLT-4. Nejprve se provedl screening cytotoxicity a antiproliferační aktivity isochinolinových alkaloidů pomocí xCELLigence na buňkách adenokarcinomu plic A549. Tato metoda zaznamenává změnu cell indexu v čase, odhalí tak potenciálně časné i pozdní cytotoxické a antiproliferační působení testovaných látek. Pomocí screeningu bylo zjištěno, že pouze dvě látky vykazovaly cytotoxickou a antiproliferační aktivitu a to chelidonin a homochelidonin. Cytoxická aktivita zprostředkovaná indukcí apoptózy a antiproliferační aktivita zprostředkovaná zástavou buněčného cyklu byla dále analyzována po působení chelidoninu a homochelidoninu u p53-deficientních (Jurkat) a p53-exprimujicích (MOLT-4) T-leukemických buněk. Nejprve se stanovila viabilita a proliferace použitím Trypanové modři a metodou kvantifikace aktivity mitochondriálních dehydrogenáz buňky. S využitím průtokové cytometrie byla detekována změna distribuce buněčné populace v jednotlivých fázích buněčného cyklu podle obsahu DNA a indukce fosforylované formy histonu H3 na serinu 10. Průtokovou cytometrii jsme dále kvantifikovali vazbu Annexinu V a propidium jodidu pro stanovení procenta buněk v apoptóze. Závěrem byla pomocí fluorescenčního mikroskopu pozorována aktivita kaspáz 3/7 po ovlivnění chelidoninem a homochelidoninem u buněk A549. Závěrem lze shrnout, že alkaloidy chelidonin a homochelidonin účinně snižovaly viabilitu, proliferaci a vedly k indukci apoptózy u testovaných buněčných linií. Expozice chelidoninu vedla k akumulaci buněk Jurkat a MOLT-4 v G2 fázi buněčného cyklu nezávisle na dávce. Aplikace homochelidoninu vedla k dávkově závislé akumulaci buněk Jurkat v G2 fázi buněčného cyklu. Naopak u buněk MOLT-4 vedly nižší koncentrace k akumulaci buněk v G1 (5 a 10 ?mol/l) a vyšší koncentrace v G2 fázi buněčného cyklu (10 a 20 ?mol/l). Expozice testovaným alkaloidům byla asociovaná s částečnou zástavou buněk v mitóze. U buněk Jurkat se vyskytovalo vyšší procento apoptických buněk než u buněk MOLT-4.