Cytotoxicita vybraných isochinolinových alkaloidů indukcí apoptózy
Diplomová práceOmezený přístupDatum publikování
2015
Autoři
Tejkalová, Veronika
Vedoucí práce
Oponent
Název časopisu
Název svazku
Vydavatel
Univerzita Pardubice
Abstrakt
Tato diplomová práce se zabývá vlivem vybraných devíti isochinolinových alkaloidů čeledi Papaveraceae a Fumariaceae na viabilitu, proliferaci a indukci apoptózy u nádorových buněčných liniích A549, Jurkat a MOLT-4. Nejprve se provedl screening cytotoxicity a antiproliferační aktivity isochinolinových alkaloidů pomocí xCELLigence na buňkách adenokarcinomu plic A549. Tato metoda zaznamenává změnu cell indexu v čase, odhalí tak potenciálně časné i pozdní cytotoxické a antiproliferační působení testovaných látek. Pomocí screeningu bylo zjištěno, že pouze dvě látky vykazovaly cytotoxickou a antiproliferační aktivitu a to chelidonin a homochelidonin. Cytoxická aktivita zprostředkovaná indukcí apoptózy a antiproliferační aktivita zprostředkovaná zástavou buněčného cyklu byla dále analyzována po působení chelidoninu a homochelidoninu u p53-deficientních (Jurkat) a p53-exprimujicích (MOLT-4) T-leukemických buněk. Nejprve se stanovila viabilita a proliferace použitím Trypanové modři a metodou kvantifikace aktivity mitochondriálních dehydrogenáz buňky. S využitím průtokové cytometrie byla detekována změna distribuce buněčné populace v jednotlivých fázích buněčného cyklu podle obsahu DNA a indukce fosforylované formy histonu H3 na serinu 10. Průtokovou cytometrii jsme dále kvantifikovali vazbu Annexinu V a propidium jodidu pro stanovení procenta buněk v apoptóze. Závěrem byla pomocí fluorescenčního mikroskopu pozorována aktivita kaspáz 3/7 po ovlivnění chelidoninem a homochelidoninem u buněk A549. Závěrem lze shrnout, že alkaloidy chelidonin a homochelidonin účinně snižovaly viabilitu, proliferaci a vedly k indukci apoptózy u testovaných buněčných linií. Expozice chelidoninu vedla k akumulaci buněk Jurkat a MOLT-4 v G2 fázi buněčného cyklu nezávisle na dávce. Aplikace homochelidoninu vedla k dávkově závislé akumulaci buněk Jurkat v G2 fázi buněčného cyklu. Naopak u buněk MOLT-4 vedly nižší koncentrace k akumulaci buněk v G1 (5 a 10 ?mol/l) a vyšší koncentrace v G2 fázi buněčného cyklu (10 a 20 ?mol/l). Expozice testovaným alkaloidům byla asociovaná s částečnou zástavou buněk v mitóze. U buněk Jurkat se vyskytovalo vyšší procento apoptických buněk než u buněk MOLT-4.
Rozsah stran
95 s.
ISSN
Trvalý odkaz na tento záznam
Projekt
Zdrojový dokument
Vydavatelská verze
Přístup k e-verzi
Práce není přístupná
Název akce
ISBN
Studijní obor
Bioanalytik
Studijní program
Speciální chemicko-biologické obory
Signatura tištěné verze
D32383
Umístění tištěné verze
Univerzitní knihovna (studovna)
Přístup k tištěné verzi
Klíčová slova
isoquinoline alkaloids, antiproliferative activity, cytotoxicity, apoptosis, A549, Jurkat, MOLT-4, isocholinové alkaloidy, antiproliferační aktivita, cytotoxicita, apoptóza