Přístup k e-verzi:Práce bude přístupná pouze v rámci univerzity od 12.11.2022
Studijní obor:Analytická chemie
Abstrakt:
Disertační práce se zabývá analýzou komplexních směsí triacylglycerolů, které
představují významnou součást naší potravy a mají důležitou roli při mnoha
biologických procesech v lidském organizmu. Předkládaný text shrnuje výsledky
dosažené při separacích a následných identifikacích triacylglycerolů a jejich
regioizomerů obsažených v rostlinných olejích, živočišných tucích a randomizačních
směsích. Získané výsledky byly uvedeny ve čtyřech publikacích uveřejněných
v mezinárodních odborných časopisech.
Jednotlivé triacylglyceroly se mezi sebou mohou lišit v mnoha parametrech.
Kombinací triacylglycerolů se v přírodě vytvářejí složité směsi, které není možné bez
jejich předchozí důkladné separace identifikovat. Za účelem získání maximálního počtu
separovaných triacylglycerolů byly optimalizovány chromatografické podmínky
v systému argentační chromatografie. Bylo zjištěno, že složení mobilní fáze a délka
chromatografické kolony měly významný vliv na účinnost separace triacylglycerolů a
především jejich regioizomerů. V optimalizovaném systému byly analyzovány vzorky
rostlinných olejů, živočišných tuků a randomizačních směsí, pro které bylo následně
popsáno retenční chování příslušných triacylglycerolů včetně jejich regioizomerů. Dále
bylo popsáno retenční chování cis-/trans- izomerů a triacylglycerolů obsahujících
neobvyklé mastné kyseliny.
Pomocí off-line dvourozměrné chromatografie byly studovány možnosti
separace komplexních přírodních směsí triacylglycerolů. Sběr frakcí byl realizován
v nevodném systému s obrácenými fázemi a jejich následná separace byla provedena
v systému argentační chromatografie. Ortogonalita obou separačních systémů byla
testována pro přírodní vzorky triacylglycerolů a jejich regioizomerů, které obsahovaly
mastné kyseliny s rozdílnou délkou acylového řetězce, počtem, polohou a geometrií
dvojných vazeb a různou regiozomerickou polohou mastných kyselin na skeletu
glycerolu. Off-line dvourozměrná chromatografie obou komplementárních módů
přinesla lepší chromatografickou selektivitu, která vedla k vyššímu počtu
identifikovaných triacylglycerolů.
Optimalizace podmínek randomizační reakce umožnila připravit ze zvolených
standardů jednoduchých triacylglycerolů příslušné regioizomery. Randomizační reakci
bylo možné použít pro jakýkoli počet a druh jednoduchých standardů triacylglycerolů.
Tato reakce byla ověřena na reálných vzorcích rostlinných olejů a dále byla používána
k přípravě různých syntetických směsí regioizomerů.
Jednotlivé triacylglyceroly, které byly separovány při analýzách, byly
identifikovány hmotnostním spektrometrem s chemickou ionizací za atmosférického
tlaku (APCI-MS). Pro identifikované triacylglyceroly byly popsány významné
fragmentové ionty pozorované v APCI hmotnostních spektrech a byla určena
převládající mastná kyselina v poloze sn-2. Pomocí popsaných fragmentových iontů
bylo uskutečněno srovnání pěti různých hmotnostních spektrometrů. Bylo zjištěno, že
vliv odlišných typů hmotnostních analyzátorů byl nižší ve srovnání s efektem počtu
dvojných vazeb, jejich polohy na acylovém řetězci a regiospecifické distribuci
acylových řetězců na skeletu glycerolu.