Tato diplomová práce se zabývá studiem separace alkaloidů chinovníku společně s kofeinem a jeho dvěma hlavními metabolity pomocí kapalinové chromatografie v systému s obrácenými fázemi. V teoretické části je nejprve charakterizována metoda kapalinové chromatografie, což zahrnuje instrumentaci kapalinového chromatografu, fázové systémy a popis procesu optimalizace chromatografických separací. V druhé polovině teoretické části jsou popsány jednotlivé skupiny alkaloidů, jejich vlastnosti a využití. Cíle experimentální práce spočívaly v optimalizaci izokratické separace na pěti chromatografických kolonách a výběru dvou nejvhodnějších kolon pro dané separace, které byly následně využity pro tvorbu metody za podmínek gradientové eluce.