Digitální knihovnaUPCE
 

Příprava proteinů v umělých expresních systémech a analýza proteinových interakcí

Diplomová práceOmezený přístup

Abstrakt

Tato práce byla zaměřena na možnosti využití separačních chromatografických metod pro výrobu dvou konkrétních proteinů Air-2 (Aurora - Related serine\ threonine dinase) a Bir-1 (Baculovirus Inhibitory Repeat) z modelového organismu C.elegans. Proteiny byly identifikovány a následně bylo snahou prokázat vazebnou interakci mezi nimi. Sekvence genů Air-2 (Aurora - Related serine\ threonine dinase) a Bir-1 (Baculovirus Inhibitory Repeat) byla naklonována do speciálního expresního vektoru. Pro Air-2 byl použit pET 28 a pro Bir-1 vektor pGEX 2T. Tyto konstrukty umožní po transformaci do vhodných buněk (E.coli) expresi proteinu. Proteiny byly z buněk izolovány chemicky i mechanicky a následně identifikovány. Proteiny Air-2 a Bir-1 byly izolovány afinitní chromatografií a poté detegovány za použití nespecifických metod jako je barvení metodu Coomassie Brilliant blue nebo barvení stříbrem.V případě proteinu Bir-1 byla identifikace i hmotnostní spektrometrií. Dále byla u obu proteinů snaha prokázat vazebnou interakci mezi sebou.Tento experiment byl však ověřen pouze nespecifickou identifikaci.

Rozsah stran

38 s.

ISSN

Trvalý odkaz na tento záznam

Projekt

Zdrojový dokument

Vydavatelská verze

Přístup k e-verzi

Práce není přístupná

Název akce

ISBN

Studijní obor

Analytická chemie

Studijní program

Chemie

Signatura tištěné verze

D21984
D21984

Umístění tištěné verze

Univerzitní knihovna (sklad)

Přístup k tištěné verzi

Klíčová slova

rekombinantní proteiny, afinitní chromatografie, interakce, Detekce, MS analýza, recombinant proteins, affinity chromatography, interaction, detection, MS analysis

Endorsement

Review

item.page.supplemented

item.page.referenced