Zobrazit minimální záznam
dc.contributor.advisor |
Červinková, Zuzana |
|
dc.contributor.author |
Nymburská, Kateřina
|
|
dc.date.accessioned |
2008-08-12T07:03:53Z |
|
dc.date.available |
2008-08-12T07:03:53Z |
|
dc.date.issued |
2008 |
|
dc.identifier |
Univerzitní knihovna (sklad) |
cze |
dc.identifier.uri |
http://hdl.handle.net/10195/29074 |
|
dc.description.abstract |
Glutathion (gama-glutamylcysteinylglycin) je nízkomolekulární thiol vyskytující se v buňce v koncentraci 0,1-10 mmol/l, a je tak nejhojnějším intracelulárním thiolem. Díky své jedinečné struktuře je glutathion spojený s mnoha důležitými pochody. Působí jako antioxidant a chrání tak buňky před působením volných radikálů a reaktivních sloučenin. Dále hraje významnou roli při detoxikaci potenciálně škodlivých xenobiotik. Glutathion se vyskytuje v redukované (GSH), nebo oxidované formě (GSSG). Za fyziologických podmínek je více než 99 % glutathionu v buňce ve formě GSH. Zvýšená koncentrace GSSG se vyskytuje při oxidačním stresu, se kterým jsou spojena onemocnění, jako je rakovina, neurodegenerativní choroby, kardiovaskulární choroby, aj. Je tedy důležité najít optimální metodu, která přesně a spolehlivě stanoví množství glutathionu. Nejvíce rozšířenými jsou HPLC metody. Jejich velkou výhodou je vysoká specifita, citlivost a reprodukovatelnost. Hlavní nevýhodou je vysoká časová náročnost, a tím nemožnost měření velkého množství vzorků během krátké doby. Další nevýhodou metod HPLC jsou vysoké náklady. Cílem této práce bylo zavedení a optimalizace nové spektrofluorimetrické metody pro stanovení GSSG, jejímž základem je stanovení fluoreskujícího produktu, který vzniká reakcí glutathionu s o ftalaldehydem. Po optimalizaci vlnových délek ( EX = 335 nm, EM = 420 nm), hodnoty pH (pH 6) a teploty (T = 4 °C), byly zjištěny tyto parametry analýzy: pro kalibraci s linearitou 0 100 mol/l GSSG, R2 = 0,9999; intraassay (n = 10), CV(%) = 3,43 %; interassay (n = 10), CV(%) = 8,17 %; REC(%) = 100,95 % a hodnota detekčního limitu 0,30 mol/l GSSG. Korelační koeficient získaný porovnáním hodnot koncentrací vzorků s HPLC/FL byl stanoven r = 0,993. Můžeme tedy říci, že byla zavedena spolehlivá, citlivá a přesná metoda pro stanovení GSSG, jejíž velkou výhodou oproti HPLC je vysoká rychlost analýzy a nízká cenová náročnost. |
eng |
dc.format |
76 s. |
cze |
dc.language.iso |
cze |
|
dc.publisher |
Univerzita Pardubice |
cze |
dc.subject |
glutathione |
eng |
dc.subject |
oxidative stress |
eng |
dc.subject |
spectrofluorimetry |
eng |
dc.subject |
glutathion |
cze |
dc.subject |
oxidační stres |
cze |
dc.subject |
spektrofluorimetrie |
cze |
dc.title |
Spektrofluorimetrické stanovení oxidované formy glutathionu |
cze |
dc.title.alternative |
Fluorimetric assay of the oxidized form of glutathione |
eng |
dc.type |
diplomová práce |
cze |
dc.date.accepted |
2008 |
|
dc.description.abstract-translated |
Glutathione (gama-glutamylcysteinylglycine) is a low molecular weight thiol, which is distributed in the cell in concentration 0.1-10 mmol/l, thus it is the most abundant intracellular thiol. Due to unique structural features, glutathione is linked to a number of important functions. Glutathione acts as an antioxidant and protects cells against the toxic effects of radicals and reactive oxygen species. It plays an important role in the detoxification of potentially harmful xenobiotics. Glutathione can be present as the reduced (GSH) and as the oxidized (GSSG) form. At physiological conditions, 99 % of glutathione is in reduced form. Higher amount of GSSG is observed during oxidative stress and is linked to cancer, neurodegerative and cardiovascular diseases. Regarding above described, it is important to find an optimal assay, which determines amount of both forms of glutathione precisely and reliably. HPLC is the mostly used method. The major advantage of HPLC is high specificity, sensitivity and reproducibility. However, it is not possible to measure a lot of samples in short time and another disadvantage is high cost. The aim of our work was optimization of GSSG assay. It is based on assay of fluorescent product, which is formed by reaction of glutathione and o phthalaldehyde. After wavelengths optimization ( EX = 335 nm, EM = 420 nm), pH value (pH = 6) and detection temperature (T = 4 °C), the analytical parameters were determined: calibration, R2 = 0.9999 with range of linearity 0 100 mol/l; intraassay (n = 10), CV(%) = 3.43 %; interassay (n = 10), CV(%) = 8.17 %; REC(%) = 100.95 % and the detection limit was 0.30 mol/l. The coefficient of correlation, which was acquired after comparision to HPLC/FL, was r = 0.993. We can assume, we have optimized the reliable, sensitive and accurate assay for determination of GSSG. Compared to HPLC, the great advantage of the spectrofluorimetric method is high speed and low cost. |
eng |
dc.description.department |
Katedra biologických a biochemických věd |
cze |
dc.thesis.degree-discipline |
Analýza biologických materiálů |
cze |
dc.thesis.degree-name |
Mgr. |
cze |
dc.thesis.degree-grantor |
Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická |
cze |
dc.identifier.signature |
D18039 |
|
dc.thesis.degree-program |
Speciální chemicko-biologické obory |
cze |
dc.description.grade |
Dokončená práce s úspěšnou obhajobou |
cze |
Soubory tohoto záznamu
K tomuto záznamu nejsou připojeny žádné soubory.
|
Tento záznam se objevuje v následujících kolekcích
Zobrazit minimální záznam
|
Vyhledávání
Procházet
-
Vše v Digitální knihovně
-
Tato kolekce
Můj účet
|